Tezuka merupakan anak sulung daripada tiga bersaudara di Toyonaka City, Osaka.[1][2] Nama samaran beliau adalah gashagasha-Atama (gashagasha adalah slanga untuk kemas, Atama bermakna kepala). Ibunya sering menghiburnya dengan memberitahu dia melihat ke langit biru, memberinya keyakinan. cerita ibunya inspirasi kreativiti beliau juga. Tezuka membesar di Takarazuka City, Hyogo dan ibunya sering membawanya ke Teater Takarazuka. The Takarazuka Revue dilpersembahkan oleh wanita, termasuk watak-watak lelaki. The Takarazuka Revue dikenali dengan muzikal romantis biasanya bertujuan untuk penonton wanita, dengan itu mempunyai kesan yang besar ke atas kerja-kerja kemudian daripada Tezuka, termasuk reka bentuk costuming beliau. Beliau telah berkata bahawa dia mempunyai "semangat nostalgia" yang mendalam untuk Takarazuka.[3]

Tezuka mula melukis komik sekitar tahun keduanya dalam sekolah rendah. Sekitar tahun kelima beliau menemui pepijat yang dinamakan "Osamushi". Secara menyerupai nama yang dia pakai osamushi sebagai nama penanya. Dia datang kepada kesedaran bahawa dia boleh menggunakan manga sebagai satu cara untuk membantu untuk meyakinkan orang untuk menjaga dunia. Selepas Perang Dunia II, beliau mencipta sekeping pertama kerja (pada usia 17), Diary of Ma-chan dan kemudian Shin Takarajima (New Treasure Island), yang bermula zaman kegemilangan manga, kegilaan yang setanding dengan buku-buku komik Amerika pada masa itu.[4]